准确称取经105℃干燥至恒量的芦丁标准试剂0.0752g,用体积分数30%乙醇60℃水浴溶解,并定量转入250mL容量瓶中,用30%乙醇定容,摇匀得0.3008g/L标准溶液。
称取15g香椿叶片放入250mL锥形瓶中,水浴加热控制80℃,用体积分数80%的乙醇,在1:10(第1次)、15(第2、3、4次)料液比的条件下,浸提4次,每次2h,过滤,用少许80%的乙醇洗涤滤渣,合并滤液和洗液,得香椿叶总黄酮提取液486mL
由图1、2可知:芦丁标准溶液和香椿叶黄酮提取液显色后都在415nm附近有吸收,且两者在用pH5.8的NaAc-HAc缓冲溶液定容后的扫描曲线的波长最接近415nm故本实验选用pH5.8的NaAc-HAc缓冲溶液,415nm为测定波长。
2.2显色剂AICl3用量的选择
按实验方法取1.0mL的标准溶液,分别加入0.4~1.4mL(间隔为0.2mL)0.5mol/LAIC1,溶液,测定A值。结果表明:0.5mol/L三氯化铝溶液用量在0.8~1.4mL范围内,对标准溶液显色后的吸光度影响很小,本试验选用0.5mol/L三氯化铝溶液1.0mL。
2.3显色温度的选择
取1.0mL的标准溶液按实验方法,控制显色温度为12、15、20、25、30、35℃显色后测定A值。结果表明:显色温度在12~35℃范围内,对标准溶液显色后的吸光度影响很小。本试验采用室温条件。
2.4显色时间的选择