绵羊白介素23(IL-23) ELISA 试剂盒 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 500ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 250ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 125ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 62.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 31.25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 绵羊白介素23(IL-23) ELISA 试剂盒 样品测定 1． 移取xx微升 去干扰液（Reagent C）到上述待测样品或标准样品管里，混匀 2． 加入xx微升 反应液（Reagent D） 3． 加入xx微升 显色液（Reagent E），混匀 4． 室温下孵育20分钟 5． 放进微型台式离心机离心3分钟，速度为5000g 6． 移取1毫升上清液到比色皿 7． 即刻放进分光光度仪检测，获得待测样品和标准样品读数 绵羊白介素23(IL-23) ELISA 试剂盒 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。