本试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对BAR基因的核酸序列设计特异性引物和探针,通过实时荧光PCR反应对转基因成分进行定性检测。本试剂盒适用于大豆、玉米、番茄、马铃薯、水稻、小麦等农产品及其加工产品中转基因成分的定性PCR检测,加工产品不包含食用油脂和调味品。
参考标准 行业标准SNT
产品规格 40次/盒
主要成分 成分 规格 PCR反应预混液 900ul×1支 阳性对照 50ul×1支 阴性对照 50ul×1支
储存条件 本试剂盒保存于-20℃,
有效期12个月。
检测步骤
1.样本处理 采用均质器、搅拌机、研钵等实验器皿对样本进行均质处理。
2.样本DNA提取 采用商品化的植物基因组DNA提取试剂盒,按照试剂盒说明提取样本DNA。对提取的DNA 进行浓度测定,DNA溶液的OD260/280比值在为zui佳。
3.试剂准备 冰上解冻反应试剂,反应液保持避光,解冻后将反应液混匀并简短离心,按每管22ul的量分装至PCR管中。
4.PCR加样 每管中加入DNA样本3ul(DNA浓度为 50ng/ul左右),盖好管盖,简短离心,同时做阳性对照,阴性对照和空白对照(以水代替样本DNA)。
5.PCR扩增 将加好的样品放置在PCR仪中,荧光通道选择FAM, PCR反应参数见表,使用不同的PCR 仪,反应参数可适当调整。 温度 时间 循环数 是否收集荧光 50℃ 2min 1个循环 否 95℃ 10min 1个循环 否 95℃ 15s 40个循环 否 60℃ 1min 是
6.结果分析 基线和阈值的设置:基线范围设置在3-15个循环,阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的zui高点。 质量控制:阳性对照CT≤30,有S型扩增曲线;阴性对照无CT值,扩增曲线为直线;空白对照无CT值,扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常,需重做实验。
结果判定
1.检测样品无CT值,曲线为直线或无S型扩增曲线,判定结果为阴性。
2.检测样品CT≤36,出现S型扩增曲线,判定结果为阳性。 3.检测样品36﹤CT﹤40并有S型扩增曲线,需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测,再次检测结果CT值仍处于36和40之间,并且有S 型扩增曲线,判定结果为阳性,否则判定为阴性。 zui低检出限 0.1% 注意事项 1.初次使用前请仔细阅读说明书,并严格按照说明书进行操作。 2.实验操作要严格分区,防止污染。 3.建议先用实时荧光PCR法检测内源基因来判定样本提取的DNA是否满足 PCR检测要求。 4.反应液反复冻融会降低灵敏度,建议分管保存。 5.本试剂盒仅供定性筛查用。