选线的第三个步骤就是道路定线。道路定线是在路线总体布局和逐段安排的基础上，按照已定的技术标准，结合细部地形、地质及其他沿线条件，综合考虑平、纵、横三方面因素，定出路线中心线的确切位置。
定线道路技术设计的重要组成部分，不仅要解决工程技术、经济问题，还需解决道路与周边环境的结合、路线线形的美观等问题。
道路定线涉及面广、影响因素多、技术要求高、开拓性强。除了需要顾及地形、地质、地物、技术标准、国家政策等硬性条件外，还需参考当地社会经济需求、乡风民俗、道路美学等隐形条件。定线工作要求设计人员具有精深的专业知识、精益求精的工作态度、熟练的定线技巧和丰富的经验。定线工作中涉及的专业内容各不相同，复杂条件下的定线工作往往需要在几个比选方案中选择，各个方案的专业侧重也不尽相同，这就要求定线工作团队需要接纳路线、桥梁、隧道、水文地质、道路划线等多方向专业人员，同时需要听取、协调当地有关方面意见，使定线工作成为全面协作的成果。
