探针法结膜支原体实时定量PCR试剂盒

探针法结膜支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Conjunctivae

货号：Mqt-con-20 规格：20个反应

货号：Mqt-con-50 规格：50个反应

货号：Mqt-con-100 规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

可以特异性检测结膜支原体，与其他生物无交叉反应。灵敏度高，检测极限为反应液中4个基因组。使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。带有UDG酶和dUTP，可降低残留DNA的污染。

结膜支原体（Mycoplasma Conjunctivae）是绵羊、山羊、羚羊等反刍动物的传染性角膜结膜炎（IKC）的主要病原体，在全球广泛分布于家养的反刍类动物中。IKC是一种常见的传染性眼病，称为小反刍动物的红眼病，可在家养和野生动物之间传播，其特点是结膜和角膜的炎症。在晚期阶段，角膜变得不透明甚至穿孔，致盲的野生动物可能从悬崖坠落或死于饥饿。一项研究表明，成年绵羊中结膜支原体抗体的阳性率为53％。支原体性IKC可以在不同物种之间传播，传播途径可能是物理接触或苍蝇等媒介昆虫。目前在大多数国家尚不清楚结膜支原体的流行程度，这可能是由于缺乏检测结膜支原体的技术。

结膜支原体感染的经典诊断方法是体外培养和后续对支原体菌落的免疫学鉴定。但是这个方法非常繁琐，需要较长的时间，且需要专业化的技术。而使用PCR法检测则具有高灵敏度和高特异性的特点，且检测时间短，仅需几个小时即可获得结果。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒选取了结膜支原体基因组内的一个膜蛋白基因进行PCR鉴定，引物经BLAST验证为特异性靶向结膜支原体，与其他生物的基因组无交叉反应。通过检测亲缘关系较近的支原体和寄生于羊的其他微生物，本试剂盒对结膜支原体具有特异性，未见假阳性结果。对来自182只山羊、绵羊或羚羊的拭子样本进行检测，本试剂盒检测灵敏度明显优于平行检测的巢式PCR法。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。