高效液相色谱 操作
了解我们如何实现样品中所含化合物的分离的一种简单方法是查看图 G. 中的图表。
流动相从左侧进入色谱柱，通过颗粒床，从右侧流出。流动方向由绿色箭头表示。首先，考虑顶部图像；它代表在零时间 [进样时刻] 的色谱柱，此时样品进入色谱柱并开始形成条带。此处显示的样品是黄色、红色和蓝色染料的混合物，在色谱柱的入口处显示为一条黑色带。[实际上，这个样品可以是任何可以溶解在溶剂中的东西；通常这些化合物是无色的，柱壁是不透明的，所以我们需要一个检测器来观察分离出来的化合物。]
几分钟后 [下图]，在此期间流动相连续稳定地流过填充材料颗粒，我们可以看到各个染料以不同的速度在不同的条带中移动。这是因为流动相和固定相之间存在竞争以吸引每种染料或分析物。请注意，黄色染料条带移动速度最快，即将退出色谱柱。黄色染料比其他染料更喜欢[被吸引到]流动相。因此，它以更快的速度移动，更接近于流动相的移动速度。蓝色染料带比流动相更喜欢填充材料。它对粒子的更强吸引力使其移动速度明显变慢。换句话说，它是该样品混合物中保留最多的化合物。红色染料条带对流动相具有中等吸引力，因此以中等速度通过色谱柱。由于每个染料条带以不同的速度移动，我们能够通过色谱法将其分离。
在 ESI-MS 分析之前配对 LC 允许在 MS 或 MS/MS 分析之前分离和定量脂质提取物。这一点很重要，因为 MS 技术通常（有专门的高分辨率例外）76-78本身不是通过离子丰度进行定量的。在 MS 分析之前分离脂质有两个明显的优势：(1) 可以将保留时间与已知的脂质标准进行比较，以进行额外的结构鉴定；(2) 分离减少离子抑制，从而提高灵敏度。高性能液相色谱法(HPLC) 特别适用于分离极性脂质，如磷脂，而超高效液相色谱 (UHPLC) 的新进展进一步提高了分离能力。2017 年的一项研究证明了此类样本分析的潜力，该研究发现含有甘油磷脂的棕榈酰基 (C16:0) 的减少与肝细胞癌呈正相关。这些结论来自分析了三大类 1700 种脂质的体外和临床样本。79然而，应该注意的是，要确定完整的脂质细胞脂质谱，需要使用多种 LC 方法。
