异硫氰酸胍
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异硫氰酸胍
CAS: 593-84-0
别名：硫氰酸胍
Guandine throcyanate 简称 GITC
分子式:CH5N3·HSCN 分子量:118.16
外观:白色结晶 熔点:115-120℃ PH(4%水溶液):4.5-7.0
紫外吸收(300nm,6M):≤0.1 abs unit
紫外吸收(410nm,6M):≤0.05abs unit
干燥失重:≤0.5%
用途：用于变性裂解细胞；提取RNA和DNA。无RNA酶和DNA酶活性 TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。
异硫氰酸胍法提取同时提取DNA病毒和RNA病毒核酸
随着分子生物学的快速发展，基因诊断成为检测动物疫病最准确而有效地手段，进行基因诊断的过程中，病毒核酸的提取是进行检测的前提条件，核酸提取的质量也影响检测的准确性。
当前，动物病毒核酸提取方法主要有经典Trizol提取法和以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法两种方法。经典Trizol提取法过程繁琐、周期长、提取效率低、技术要求高，以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法成本较高、提取RNA的质量不高、且只能提取RNA病毒。
一种同时提取血清、双拭子中动物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法，包括步骤：对待提取物使用异硫氰酸胍裂解液裂解；硅胶膜吸附RNA；洗液Ⅰ除去杂蛋白；洗液Ⅱ洗去杂质；DEPC水洗脱核 酸；上述异硫氰酸胍裂解液包括3-7M异硫氰酸胍、0.6%-1.0%TriTon-100、30-50mM Tris-Cl、5-15mM DTT、60-90μg/mL蛋白酶K、10-30mM EDTA，PH在4.3-4.6。
上述洗液Ⅰ包括5-6M盐酸胍，53-59%无水乙醇，K70-90μg/mL蛋白酶，PH在6.4-6.6；上述洗液Ⅱ包括70-80%乙醇。
进一步地，上述异硫氰酸胍裂解液包括5M异硫氰酸胍、0.8%TriTon-100、40mM Tris-Cl、10mM DTT、80μg/mL蛋白酶K、20mM EDTA，pH在4.5。进一步地，上述洗液Ⅰ包括5.5M盐酸胍，56%无水乙醇，80μg/mL蛋白酶K，PH在6.5。进一步地，上述洗液Ⅱ包括75%乙醇。
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