一.细胞简介:
细胞名称:NIT-1/小鼠胰岛素瘤β细胞
智立编码:20211259101371674
组织来源胰腺/朗格汉斯胰岛
生长特性贴壁细胞
细胞形态上皮细胞样
生物安全等级2
生长培养基Ham'sF-12K+10%FBS+1%P/S
传代比例1:2-1:3
换液频率2~3次/周
冻存条件
冻存液:55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
二. 培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
保藏机构ATCC;CRL-2055
培养条件:37℃,5%CO2,90%RPMI-1640+10%FBS。
三. 复苏步骤:
1.新制100mm平皿1个,含12mL上述培养液;
2.冻存管从液氮或-80℃中取出,37℃水浴1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏;
3.用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中,顺时针摇匀;
4.放入(37℃,5%CO2)培养箱中,过夜换液,2-4天长满。
传代/冻存:将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入2mL(/100mm皿/T25瓶)胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA),在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落时,吸除大部分胰酶,留约0.5mL,移至培养箱消化,约1min取出。
1.传代:6mL培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后可1:3传代;
2.冻存:3mL冻存液(50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为3支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存。
四. 注意事项:
1.收货当天发现异常,请在24小时内及时联系客服,逾期视为收货良好;
2.冻存管形式,收货后及时置于-80℃冰箱保存,若长时间不使用,应过夜转移至液氮保藏;
3.T25形式,收货后先培养瓶原装置于培养箱静养4h,然后再对细胞进行常规操作。
4.复苏时每管一次用完不得留存,复苏后传一代,即可正常使用。请严格按照本说明操作,否则造成细胞失活等情形,不予提供补发服务。