SW948人结肠腺癌细胞的培养方法

  • 发布时间:2022-04-13 10:01:53,加入时间:2021年07月21日(距今1013天)
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  一.细胞介绍

  细胞名称:SW948人结肠腺癌细胞(STR鉴定)

  人结肠腺癌细胞SW948[SW-948],角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。该细胞c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb和fos癌基因表达呈阳性,未检测到N-myc和sis癌基因表达。

  STR鉴定结果为:Amelogenin:X;CSF1PO:12;D13S317:10,11;D16S539:11,12;D5S818:11;D7S820:9,11;THO1:6,9.3;TPOX:8,11;vWA:16,18

  二.细胞特性

  1)来源:白人女81结肠

  2)形态:上皮样贴壁生长

  3)含量:>1x106细胞数

  4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

  5)用途:仅供科研使用。

  三.细胞的培养

  培养基及培养冻存条件准备

  1)准备L15培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

  2)培养条件:气相:空气,100%;该细胞培养不能通入CO2,如果没有条件准备空气气相100%的培养箱的,可以采用不透气密封盖的T25培养瓶来培养,培养过程中每天将细胞拿出培养箱换1-2次空气。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。参考传代周期:5-7天,换液2-3天一次。

  3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

  四.细胞处理:

  1)冻存细胞的复苏:

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  五.运输和保存

  干冰运输及复苏好存活细胞

  (1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

  (2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

  六.细胞接收后的处理

  1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

  2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为时收到时细胞状态的依据。

  3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

  4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。

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